सह-प्रतिरक्षकअवक्षेपण (को-इम्युनोप्रेसिपिटेशन co-IP) द्वारा FLAG-चिन्हित प्रोटीन P और चैपरॉन H की, पात्रे परस्पर क्रिया द्वारा परिनक्षण किया गया। को-चैपरॉन A को शामिल किया गया और साईक्लोहेक्सीमाइड CHX की उपस्थिति या अनुपस्थिति में Co-IP किया गया। Co-IP प्रयोगों के परिणाम नीचे दिखाऐ गऐ हैं।

इन प्रयोगों की निम्न व्याख्याओं में से कौन सी गलत है?

सही उत्तर सह-चैपेरोन A और प्रोटीन P के बीच अंतःक्रिया चैपरोन H से स्वतंत्र है।

अवधारणा :

सह-इम्यूनोप्रेसीपिटेशन (co-IP) एक तकनीक है जिसका उपयोग किसी कोशिका या लाइसेट में प्रोटीनों के बीच भौतिक अंतःक्रियाओं का आकलन करने के लिए किया जाता है, जिसमें एक प्रोटीन को नीचे खींचकर यह पता लगाया जाता है कि उसके साथ क्या सह-अवक्षेपित होता है।

• यह विधि एक लक्ष्य प्रोटीन (FLAG-टैग प्रोटीन P) और उसके साथ भौतिक रूप से संबद्ध किसी भी प्रोटीन को पृथक करती है।
• FLAG-P को नीचे खींचने के बाद, इम्यूनोप्रीसिपिटेटेड नमूनों में चैपरोन H और सह-चैपरोन A की उपस्थिति इन प्रोटीनों के बीच परस्पर क्रिया को इंगित करती है।

साइक्लोहेक्सीमाइड (CHX): साइक्लोहेक्सीमाइड प्रोटीन संश्लेषण को रोकता है

• CHX के साथ : साइक्लोहेक्सीमाइड नए प्रोटीन के संश्लेषण को अवरुद्ध करता है, इसलिए किसी भी ज्ञात अंतःक्रिया में पहले से मौजूद प्रोटीन शामिल होंगे।
• बिना CHX: इस स्थिति में, नव संश्लेषित और पहले से मौजूद दोनों प्रोटीन उपस्थित होते हैं।

वेस्टर्न ब्लॉट की व्याख्या:

प्रोटीन P और चैपरोन H के बीच अंतःक्रिया:

• CHX की अनुपस्थिति में, चैपरोन H प्रोटीन P के साथ अंतःक्रिया करता है (जैसा कि IP: FLAG नमूनों में देखा गया है)।
• CHX की उपस्थिति में, अंतःक्रिया समाप्त हो जाती है, जिसका अर्थ है कि चैपरोन H केवल नव संश्लेषित प्रोटीन P के साथ अंतःक्रिया करता है। इसका तात्पर्य यह है कि चैपरोन H प्रोटीन P के साथ प्रोटीन अंतःक्रिया के प्रारंभिक चरण या प्रारंभिक तह में शामिल होता है।

प्रोटीन P और सह-चैपरोन A के बीच अंतःक्रिया:

• सह-सहायक A, सहायक H के साथ अंतःक्रिया करता है, P के साथ सीधे नहीं: यह लेन 2 द्वारा समर्थित है, जहां केवल FLAG-P देखा जाता है जब H अंतःक्रिया में मध्यस्थता नहीं कर रहा होता है, भले ही A और P दोनों मौजूद हों।

स्पष्टीकरण :

कथन 1: प्रोटीन P चैपरोन H और सह-चैपरोन A के साथ परस्पर क्रिया करता है।

• सही। परिणाम दर्शाते हैं कि प्रोटीन P चैपरोन H (बिना CHX के) और सह-चैपरोन A (CHX के साथ और बिना दोनों) के साथ परस्पर क्रिया करता है।

कथन 2: चैपरोन H केवल नव संश्लेषित प्रोटीन P के साथ अंतःक्रिया करता है।

• सही। चैपरोन H और प्रोटीन P के बीच की अंतःक्रिया केवल CHX की अनुपस्थिति में देखी जाती है (यानी, जब प्रोटीन संश्लेषण चल रहा हो)। यह दर्शाता है कि चैपरोन H केवल नए संश्लेषित प्रोटीन P के साथ अंतःक्रिया करता है।

कथन 3: सह-चैपेरोन A और प्रोटीन P के बीच अंतःक्रिया चैपेरोन H से स्वतंत्र है।

• यह गलत है, क्योंकि जब चैपरोन H शामिल नहीं होता है तो सह-चैपरोन A प्रोटीन P के साथ अंतःक्रिया नहीं करता है, क्योंकि जैसा कि लेन 2 में देखा गया है, P और सह चैपरोन A दोनों मौजूद हैं, लेकिन ब्लॉट में केवल P प्रोटीन का बैंड देखा गया है।

कथन 4: चैपरोन H और प्रोटीन P के बीच अंतःक्रिया सह-चैपरोन A से स्वतंत्र है।

• चैपरोन H और प्रोटीन P के बीच की अंतःक्रिया सह-चैपरोन A से स्वतंत्र है, क्योंकि चैपरोन H, सह-चैपरोन A की उपस्थिति या भागीदारी के बिना भी प्रोटीन P को बांध सकता है। यह स्पष्ट रूप से उन लेन में दिखाया गया है जहां चैपरोन H और प्रोटीन P को एक साथ नीचे खींचा जाता है, तब भी जब सह-चैपरोन A इम्युनोप्रेसिपिटेसन में शामिल नहीं होता है।